產(chǎn)品編號：M005

包裝規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介

本公司的離心柱式通用RNA提取試劑盒是一種基于離心柱法從細(xì)胞、組織及細(xì)菌中高效、高質(zhì)量地抽提抽提總RNA的試劑盒，所抽提RNA可以用于如反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、qPCR、cDNA克隆等下游實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒抽提總RNA的得率高、純度高。

下圖為本試劑盒與YD、In品牌同類產(chǎn)品的RNA抽提效果對比。樣品為50萬個(gè)293T細(xì)胞，洗脫液用量均為50μl，取5μl洗脫樣品在1%瓊脂糖凝膠中電泳約8分鐘后拍照。實(shí)際抽提效果會因?qū)嶒?yàn)條件、檢測儀器等的不同而存在差異，本圖僅供參考。

有效期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究使用。
• 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴護(hù)目鏡、一次性手套和口罩操作。
• 所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心，避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
• 需自備無水乙醇。

操作步驟

1. 樣本處理：
2. 組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1mLLysis Buffer，充分勻漿。
3. 貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)基，每10⁶細(xì)胞加1mL Lysis Buffer，吹打混勻。
4. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，每10⁶動物、植物和酵母細(xì)胞或每10⁷細(xì)菌細(xì)胞加1mLLysis Buffer，吹打混勻。
5. 室溫放置5min，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
6. 每1mL樣品中加2mL RNA pure，蓋好管蓋，劇烈振蕩15s，室溫放置3min，4℃ 12000 rpm離心15min。
7. 吸附柱預(yù)處理：向吸附柱中加入500μLWash Buffer Ⅰ，室溫靜置2min，4℃ 12000rpm離心2min，棄廢液。
8. 小心吸取步驟3中上層無色水相至新管中，并加入200uL乙醇吹打混勻，轉(zhuǎn)移混合物至吸附柱中，室溫放置2min，4℃ 12000rpm離心15s，棄廢液。
9. 向吸附柱中加入600μL Wash BufferⅡ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，4℃ 12000 rpm離心15s，棄廢液。重復(fù)洗滌一次，棄廢液。
10. 4℃ 12000rpm離心2min，棄掉收集管。
11. 將吸附柱放入新管中，向膜ZY滴加40-100μL RNase-free water，室溫放置2min，4℃ 12000rpm離心2min即得到RNA。

常見問題解答

1.RNA得率低

樣本未充分裂解，需降低初始樣本量。

2.RNA降解

樣本保存不當(dāng)，樣本收集后需立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，或保存于-80℃；

實(shí)驗(yàn)相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free。

3.RNA被污染

上層水相被中間相污染，轉(zhuǎn)移上層水相時(shí)，注意不要擾動中間層，并轉(zhuǎn)移體積低于500uL。

4.A260/A280比值低

樣本未充分裂解，需降低初始樣本量；

樣本被污染，離心分層后不要轉(zhuǎn)移全部上層水相；

樣本檢測吸光度時(shí)使用無酶水稀釋會造成比值降低，可使用10mMTris-HCl(5)稀釋。