MolPure^® Cell RNA Kit 適用于從 96、24、12、6 孔板培養(yǎng)細胞 (< 1×10⁶)總 RNA 提取。MolPure^® DNA清除/RNA吸附通用柱為本公司特有新型材料，配合本公司獨特的緩沖液配方可最大限度將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除。提取過程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巰基乙醇等有機溶劑，也不需要用到耗時的異丙醇或乙醇沉淀。操作簡便，< 8 min即可完成培養(yǎng)細胞總RNA的提取。提取的 RNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種下游應(yīng)用實驗，如 RT-PCR、RT-qPCR、體外轉(zhuǎn)錄、分子克隆等。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

常溫運輸。室溫避光保存，有效期24個月。2-8℃可保存更長時間。

注意事項

1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

2. 注意觀察各溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時），可37℃溫浴復(fù)溶至溶液澄清，避免影響使用效果。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

實驗前準備

1. 自備設(shè)備和試劑：臺式離心機、水浴鍋或金屬浴，1.5 mL RNase-free離心管，液氮，無水乙醇等。

2. 本試劑盒可以抑制RNase活性，不需要低溫離心，所有的離心步驟常溫進行。

3. 首次使用前，在結(jié)合液BD^*（19231-E）瓶中加入標簽指定量的無水乙醇（5 T/50 T分別加入2.4 mL/24 mL無水乙醇），充分混勻后使用，并做好標記。

4. 首次使用前，在漂洗液W^*（19231-F）瓶中加入標簽指定量的無水乙醇（5 T/50 T分別加入5.2 mL/52 mL無水乙醇），

充分混勻后使用，并做好標記。

操作方法

一、樣本預(yù)處理

5. 針對貼壁細胞：不需消化，直接裂解；或離心收集細胞后，加入350 μL裂解液LB (< 1×10⁶個細胞)，用移液器反復(fù)吹打混勻(直到看不到細胞團為止)。
6. 針對懸浮細胞：直接離心收集細胞，加入350 μL裂解液LB (< 1×10⁶個細胞)，用移液器反復(fù)吹打混勻(直到看不到細胞團為止)。

二、RNA提取

1. 將處理好的勻漿液加到DNA清除/RNA吸附通用柱上(柱子放在2 mL收集管內(nèi))，13,000 rpm離心1 min，收集含有RNA的濾液。

2. 估算濾液體積后加入等體積的結(jié)合液BD^*(請先確認已加入無水乙醇!)，立即輕柔吹打混勻。

3. 將上述混合液全部加入新的DNA清除/RNA吸附通用柱中，13,000 rpm離心30 s，棄掉濾液。

4. 加入700 μL去蛋白液，室溫30 s，13,000 rpm離心30 s，棄掉濾液，將DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管中。

5. 加入500 µL漂洗液W^*(請先確認已加入無水乙醇!)，13,000 rpm離心30 s，棄掉濾液。

6. 重復(fù)一遍步驟5，將DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管內(nèi)。

7. 空柱13,000 rpm離心2 min，除去殘留漂洗液W^*。

8. 將DNA清除/RNA吸附通用柱放入新的1.5 mL RNase-free離心管中，在膜中央加入30-50 µL RNase-free H₂O，室溫放置1 min，然后13,000 rpm離心1 min，收集濾液，即為RNA溶液。樣品可置于-80℃長期保存。

【注】：可通過以下方式提高回收產(chǎn)量：①65℃預(yù)熱RNase-free H₂O；②將RNA濾液再次上柱，室溫放置1 min后，洗脫。 

HB230104