產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Indo-1是一種細(xì)胞生物學(xué)常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用最廣泛的比率法測(cè)定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結(jié)合Ca²⁺，同時(shí)可發(fā)出熒光，結(jié)合 Ca²⁺后的最大發(fā)射波長(zhǎng)從結(jié)合前的475 nm向400 nm（Ca2+飽和時(shí)）偏移，該信號(hào)變化可被流式細(xì)胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長(zhǎng)激發(fā)該探針，在400 nm 和475 nm 的波長(zhǎng)處分別檢測(cè)結(jié)合鈣離子和未結(jié)合鈣離子的熒光信號(hào)，通過二者熒光強(qiáng)度的比率測(cè)定鈣離子濃度。由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，為此在其負(fù)性基團(tuán)上結(jié)合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負(fù)電荷，極大的提高了細(xì)胞滲透性。在細(xì)胞內(nèi)，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca²⁺可逆性結(jié)合。

組分信息

產(chǎn)品性質(zhì)

儲(chǔ)存條件

室溫運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。

使用說明

1. Indo-1/AM儲(chǔ)存液的配制

利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2 - 5 mM的儲(chǔ)存液，該儲(chǔ)存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長(zhǎng)可保存6個(gè)月，但是避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。

2. Indo-1/AM工作液的配制

利用合適緩沖液（如HHBS）將Indo-1/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。

注：① 對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Indo-1/AM。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

② Indo-1/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。

③ Pluronic F-127 可以防止Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。

3. 取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。

注：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會(huì)降低Indo-1/AM進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會(huì)使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。

4. 將 Indo-1/AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)30 - 60 min。
5. 用緩沖液（如HHBS）洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細(xì)胞。
6. 數(shù)字成像顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞。

注：某些細(xì)胞具有自體熒光會(huì)影響結(jié)果分析，需使用未加載探針細(xì)胞做對(duì)照，在結(jié)果分析時(shí)在同一波長(zhǎng)下扣除自熒光。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請(qǐng)確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請(qǐng)將其短暫離心，以保證粉末落入管底

5. 第一次使用時(shí)，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時(shí)間內(nèi)使用，以保證實(shí)驗(yàn)效果。

6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存。

7. 建議您在正式實(shí)驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時(shí)間等，找到最佳實(shí)驗(yàn)條件。

Ver.CN20241124