Fluo-Oil 135 是Emulseo 提出的一種氟化油，作為3M Novec HFE7500油的替代品。 Fluo-Oil 135 的化學(xué)和物理化學(xué)性質(zhì)與NovecTM 7500 相似，如下表所示:

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優(yōu)勢
生物相容性、可重復(fù)性和穩(wěn)定性。

如何使用？
氟化油Fluo-Oil 135用于稀釋Emulseo表面活性劑或已經(jīng)用Fluo-Oil 135油稀釋的表面活性劑。

保存
室溫下避光保存

安全注意事項
● 避免吸入、攝入和接觸皮膚和眼睛
● 穿戴耐化學(xué)腐蝕的個人防護裝備
● 戴上合適的手套
● 穿合適的防護服
● 戴側(cè)護罩的安全眼鏡

與3M HFE7500油產(chǎn)生液滴性能的測試比較
分別用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀釋FluoSurf neat表面活性劑，得到4w/w%的質(zhì)量濃度。

水滴產(chǎn)生或油包水液滴產(chǎn)生的兩相流速：
油相流速為300μL/hr，水相流速為100μL/hr。
水相為PBS溶液或100μM熒光素的PBS溶液（用于測試液滴的泄露）

倒置顯微鏡觀察和Image J軟件分析。

一、液滴尺寸及其分布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，產(chǎn)生相似尺寸的水滴。在既定流速參數(shù)下，液滴的平均直徑為110μm。液滴尺寸的CV分別為2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴穩(wěn)定性
大多數(shù)研究團隊使用液滴微流體進行細胞封裝或 PCR 應(yīng)用。 因此，需要通過 PCR 的加熱循環(huán)以及在 37°C 下長期孵育來產(chǎn)生穩(wěn)定的液滴。 表面活性劑的選擇至關(guān)重要，但選擇油同樣重要，以確?？芍貜?fù)的實驗以及單分散液滴群的生成和保存。

分別從三個方面測試液滴的穩(wěn)定性：一是把液滴重新注入到玻璃觀察腔室內(nèi)；二是經(jīng)典的PCR熱循環(huán)過程，循環(huán)過程30次，每次熱循環(huán)為98°C運行10s, 50°C運行5s, 72°C運行10s；三是置于37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)放置3天。對1萬個液滴進行分析。

無論是在 Novec? HFE 7500 還是 Fluo-Oil? 135 中形成 FluoSurf? 穩(wěn)定的液滴，在 PCR 加熱循環(huán)后或在 37°C 孵育 3 天后，液滴平均尺寸在生成時保持不變 [約 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴種群仍然是單分散的。 根據(jù)統(tǒng)計分析，計算出在加熱循環(huán)后，只有 5% 的整體液滴的大小與平均初始液滴直徑的差異超過 10%。

將氟化油從 Novec? HFE 7500 切換到 Fluo-Oil? 135 對液滴穩(wěn)定性沒有影響。

三、液滴內(nèi)的分子滯留

基于液滴的化學(xué)或生化分析依賴于試劑在單個液滴中保持隔離。 泄漏到連續(xù)相和液滴之間的交換，即使很低，也會影響結(jié)果的完整性，因此，分子保留是選擇氟化油時要考慮的重要參數(shù)。 眾所周知，氟化油會限制液滴之間的分子交換，因此應(yīng)驗證切換油的影響。

同時生成兩種油包水乳液[“空”（負載 PBS）和“滿”（負載熒光素）液滴]，一次使用 Novec? HFE7500，然后使用 Fluo-Oil? 135 作為連續(xù)相。 兩種混合物，每一種都包含兩個種群，在 37°C 下孵育，并在不同的時間點拍攝照片。 使用 ImageJ 軟件對液滴內(nèi)熒光強度的演變進行了統(tǒng)計定量分析。

上圖顯示了兩個群體之間平均熒光強度差異的演變（染料加載和空液滴）以及在初始時間點和 48 小時后相關(guān)的熒光和明場圖片。

在 24 小時的過程中，兩種氟化油產(chǎn)生的液滴中熒光素的泄漏率相似（約 15% 泄漏），并且在 Fluo-Oil? 135 中產(chǎn)生液滴的情況下保持恒定 3 天。相反，在 24 小時后， Novec? HFE7500 中液滴的泄漏繼續(xù)減少并達到 30% 左右。 這種較長孵育時間的較差保留性能可歸因于后一種油的粘度略低，加速了液滴之間更快的分子交換。

結(jié)論
對于基于液滴的微流體應(yīng)用，從一種氟化油類型切換到另一種類型可能會對微流體實驗的過程產(chǎn)生重大影響，尤其是對液滴的有效生成產(chǎn)生重大影響。 在 Novec? HFE7500 和 Fluo-Oil? 135 的情況下，已證實更換這兩種氟化油對實驗條件和結(jié)果沒有影響。 當使用 Fluo-Oil? 135 作為連續(xù)相時，甚至可以觀察到熒光素在液滴內(nèi)的更好保留。

氟化油Fluo-Oil? 135 是用于液滴微流體應(yīng)用的 Novec? HFE7500 的有效替代品。